| dc.description.abstract | Latar Belakang: Pemalsuan produk pangan, seperti penambahan daging ayam
dalam produk olahan, merupakan isu penting dalam industri makanan sehingga
perlu adanya proses autentikasi. Autentikasi dilakukan untuk memastikan
kesesuaian isi produk dengan label. Validasi metode diperlukan untuk
membuktikan bahwa prosedur analisis menggunakan metode Real-Time PCR-
spesific primer 12S rRNA dapat digunakan untuk proses autentikasi.
Tujuan: Untuk mengetahui kondisi optimal analisis, presisi, sensitivitas, dan
spesifisitas metode Real-Time PCR-spesific primer pada gen 12S rRNA dalam
mendeteksi DNA ayam dalam produk olahan.
Metode: Sampel berupa daging ayam pedaging segar yang diperoleh dari toko
swalayan di Kabupaten Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta. DNA diisolasi
menggunakan protokol Favorprep Food DNA Extraction Kit dengan metode spin
column dan dicek kemurniannya menggunakan nanodrop spektrofotometer UV-Vis.
Optimasi dilakukan untuk memperoleh kondisi analisis yang optimal. Uji presisi,
sensitivitas, dan spesifisitas dilakukan menggunakan Real-Time PCR, dengan hasil
dievaluasi menggunakan kurva amplifikasi dan kurva leleh.
Hasil: Hasil kadar DNA ayam didapatkan 341,58 ng/μL dan 82,52 ng/μL dengan
rasio kemurnian OD 260/280 1,88 dan 1,86. Kondisi optimal Real-Time PCR, yaitu
pra-denaturasi 95 oC 2 menit, denaturasi 95 oC 30 detik, annealing 61,7
oC 30 detik,
elongasi 72 oC 30 detik, dan pembacaan kurva leleh sebanyak 28 siklus dengan
konsentrasi primer 5 pmol. Hasil uji presisi didapat RSD 1,79% untuk nilai Ct dan
0,33% untuk nilai Tm, hasil batas deteksi mencapai kadar 3,4158 pg/μL, serta hasil
uji spesifisitas yang menunjukkan primer spesifik hanya pada daging ayam dan
didapat nilai melting temperature (Tm) ayam 79,50 oC. | en_US |
