Validasi Metode Bioanalisis Natrium Fenitoin dalam Sampel Plasma Manusia menggunakan Metode UHPLC-DAD

Abstract

Latar belakang: Natrium fenitoin merupakan antiepilepsi dengan indeks terapetik sempit sehingga memerlukan pemantauan kadar obat dalam darah. Pendekatan instrumen UHPLC menghadirkan metode yang lebih sensitif daripada HPLC-UV. Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk melakukan validasi metode bioanalisis natrium fenitoin menggunakan UHPLC-DAD dengan kolom spesifikasi HPLC sebagai langkah awal transisi berdasarkan sumber daya yang tersedia. Metode: Spiked- sampel plasma manusia diesktraksi menggunakan asetonitril, fase diam kolom puroshpere® Star RP-18 end-capped 250mm x 4,6mm x 5μm, fase gerak dapar fosfat: asetonitril (60:40 v/v), laju alir 1 mL/menit, panjang gelombang 205 nm. Hasil parameter validasi merujuk pada US-FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation 2018. Hasil: Kurva kalibrasi yang didapatkan memiliki linearitas (r=0,9997), LLOQ

sebesar 1 μg/mL yang memenuhi kriteria %diff. Akurasi dan presisi baik within- run maupun between-run didapatkan hasil %diff ±15% untuk QCL, QCM, dan

QCH, dan ±20% untuk LLOQ serta %CV <11,19%. Metode bioanalisis bersifat selektif dengan tidak ditemukan interfensi pada waktu retensi analit. Uji %recovery didapatkan rerata hasil sebesar 96,71% serta pada carryover tidak ditemukan puncak pada waktu retensi natrium fenitoin setelah injeksi konsentrasi tinggi (ULOQ). Kesimpulan: Pengembangan metode yang dilakukan terbukti memilki validitas yang sesuai dengan kriteria FDA 2018 sehingga dapat diaplikasikan dalam pemantauan kadar fenitoin dalam darah.